非变性组织/细胞裂解液使用说明书

 

规格:100ml,本产品配有一支PMSF(1.5ml)

保存:4℃保存,有效期1年,长期保存可置于-20℃。

产品简介：

非变性组织/细胞裂解液内含非离子型去垢剂，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。

使用说明：

根据使用量，取每1ml裂解液加入10μlPMSF，使PMSF的终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。

1、 样品前处理：

a） 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，冰上放置裂解5-10分钟。

b） 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液，冰上放置裂解5-10分钟。期间可以用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c） 对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量）。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、 后处理：

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀、免疫共沉淀等操作。

注意事项：

    为取得的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。裂解时间可根据实验需求进行优化处理。

非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴性手套操作。