本产品是用于从单细胞(或数个细胞)中制备和扩增全基因组的试剂盒。它是整合单细胞裂解液和全基因组扩增试剂盒而成。本产品有如下优点:
1. 即开即用,不需要单独准备所需试剂。
2. 可以扩增单个细胞的基因组达上万倍。
3. 具有全基因组扩增的所有特点,包括高产量和高保真性。
4. 可使用各种来源的样品,包括培养细胞和胚胎细胞等。
5. 产物可用于多种后续试验,包括多重PCR、长片端PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异,微卫星差异、SNP、STR)等。
低温运输、-20℃保存, 有效期一年。
使用方法:
1. 将细胞悬浮在自备的PBS缓冲液或其他合适的缓冲液中,在显微镜下用毛细管转移单个细胞(或数个细胞,总体积不超过2.5 uL)到含有2.5 μL单细胞裂解液A的0.2 mL PCR管中,室温放置2分钟。如果使用纯化好的DNA溶液,则直接将2.5 μL的DNA溶液和2.5 μL的单细胞裂解液A混合,室温放置2分钟。
2. 加入5 μL 单细胞裂解液B,95℃保温5分钟,室温短暂离心半分钟。
3. 然后冰上放置5-10分钟。
4. 加入10 μL 单细胞专用WGA Mix,轻柔吹打混合均匀。
5. 加入0.5 μL Phi 29 DNA聚合酶(10 U/μL),轻柔吹打混合均匀。
6. 30℃保温3-12小时。使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴,在样品管中加入30-50 μL石蜡油以防水分蒸发,因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁,从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高,WGA三小时即可检测到DNA扩增。
7. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注:由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性,所以将其灭活以免干扰后续反应。
8. 立即取3-5 μL WGA反应液进行电泳检测扩增效果。注意:WGA缓冲液中不含有甘油和电泳染料,所以需要先加上样缓冲液。
9. 扩增的DNA可以用于后续试验或冰箱长期保存