丝状真菌线粒体蛋白提取试剂盒


规格 50T 100T

线粒体提取液A 200ml 400ml

线粒体蛋白提取液B 20ml 40ml

蛋白酶抑制剂混合物 100ul 200ul

储存条件:

2-8℃保存。

有效期:

一年。

注意事项:

● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管

底,避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。

● 使用性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清

洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品简介:

线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、

糖、部分氨基酸在此进行终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。

对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的,本试剂盒用简便快速的方法即

可在1 小时内提取得到线粒体蛋白。

试剂盒以外自备试剂和仪器

● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管

● 涡旋振荡器 ● 冰箱,冰盒

使用方法:

使用注意事项:

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

? 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。


1、 取500mg-1g 丝状真菌样本,采用以下其中一种方法处理:

I. 加入3ml 提取液后用匀浆机/Dounce 匀浆器匀浆。

II. 置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入3ml 冷的提取液 。

III. 加入3ml 提取液直接置冰上研磨。

2、 将匀浆用250 目细胞筛或3 层纱布或脱脂棉过滤。或者在4℃,100×g 力条件

下离心1 分钟,收集上清,弃沉淀。

3、 将滤液700g 离心10 分钟,取上清。

4、 将上清11000g 离心20 分钟。

5、 弃上清,留沉淀。

6、 每200ul 蛋白提取液B 中加入1ul 蛋白酶抑制剂混合物混匀。用200-400ul 蛋

白提取液B 重悬沉淀,在4℃条件下振荡20 分钟,至无明显沉淀。

7、 在4℃,14000g 条件下离心15 分钟。

8、 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到真菌线粒体蛋白。

9、 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。

注:

①  建议用BCA 法进行蛋白定量。

②  蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。