产品特点:

本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。使用pUC19 质粒检测本产品,转化效率可达107。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。

该感受态细胞用于以T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA 聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3 区的lacUV5 启动子,该区域整合于BL21 的染色体上。

菌株基因型为:F - ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm (DE3)

干冰运输、-80℃保存,有效期半年。

使用方法

1. 取感受态细胞置于冰浴中。转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可以根据实际情况分装使用。

以下实验以50 μL 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μL 感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30 分钟。

3. 42℃热击45 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入450 μL 无菌的SOC 或LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm 振荡培养45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC 或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16 小时。

注意:

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000 rpm,2 分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养

3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。