本产品是基于离心柱/硅胶膜原理的、专门用于从新鲜或冷冻的动物(包括人和禽类)抗凝全血中提取基因组DNA的试剂。它具有下列特点:
1. DNA纯净,OD260/280在1.8-2.0之间。不含蛋白质和RNA污染,可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2. 产量高,一般为1-10 ug/mL全血(对哺乳动物血液)。
3. 操作简单,整个过程约20分钟,全室温操作,适合大规模样品处理。
4. 用量广泛, 每次可以处理少达20 uL(对禽类动物血液), 多达1 mL的血液(对哺乳动物血液)。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
常温运输、4℃保存,有效期一年
1. 在0.02-1 mL新鲜或抗凝血液(冷冻血需先37℃水浴融化)中加入0.5 mL红细胞裂解液(A型),吹打混匀。
a) 哺乳动物,血液使用量以300 uL以下为宜,使用量越大产量越高,但产率会降低。如果血液多于300 uL,重复1-2步两次可以提高产率。
b) 禽类动物,血液使用量以20 uL以下为宜,可以从第3步做起。
2. 室温12,000-15,000 rpm离心5分钟,沉淀呈粉红色,小心倾去上清。
3. 再短暂离心半分钟,吸弃残留的液体。此步有利于后面的细胞裂解,但一般可以省略。
4. 向有沉淀的离心管内加入0.5 mL溶液A(溶液A有少量晶体沉淀,用前需要摇晃均匀),用移液枪吹打使沉淀充分悬浮起来。此步目的是裂解细胞,释
放DNA,所以吹打越充分越好。
5. 静置2分钟待溶液变清亮后,将液体转移到离心吸附柱中并静置2-5分钟,以使DNA与膜充分结合。
6. 12,000 rpm离心半分钟,DNA将吸附到膜上,弃收集管中的废液。
7. 加入0.7 mL的通用洗柱液,12,000 rpm离心半分钟,弃收集管中的废液。
8. 加入0.3 mL的通用洗柱液,12,000 rpm离心半分钟,弃收集管中的废液。
9. 12,000 rpm离心半分钟,甩干残留液体。此步很重要,以去除膜上残留通用洗柱液,否则会影响后续反应。
10. 将离心吸附柱置于一新的1.5 mL塑料离心管(自备)中,加入适量50 Ul DNA洗脱液2.0,室温放置2分钟。如果将DNA洗脱液2.0在65℃预热后再使用,洗脱DNA的效果会更好。
11.12,000 rpm离心半分钟,离心管底溶液即DNA溶液。可以立即使用或放冰箱长期保存。