产品特点:

Bst DNA 聚合酶大片段是将缺少5' →3' 外切核酸酶结构域的Bacillusstearothermophilus(嗜热脂肪芽孢杆菌)DNA 聚合酶基因在E.coli 中表达纯化而得,它具有下列特点:

1. 5′→3′DNA 聚合酶活性,但不具有5′→3′外切核酸酶活性,因此没有纠错功能。

2. 嗜温性,适反应温度为68℃,建议反应温度不要超过70 ℃。

3. 强链置换能力,可以用于DNA 链置换反应和LAMP 扩增。还可用于68℃DNA 测序(该条件尤其适用于富含GC 的模板和纳克级的模板)。

4. 不能用于热循环测序或PCR,80℃ 10 分钟即可失活。

低温运输,-20℃保存、有效期一年。长期贮存需补加100 μg/mL BSA 或0.1% Triton X-100。

1×Bst DNA 聚合酶Buffer 的组成:

20 mM Tris-HCl (pH 8.8 @ 25 ℃ ), 10 mM KCl, 10 mM(NH4)2SO4, 2 mM MgSO4, 0.1% Triton X-100

活性定义及检测条件

1 U 指65℃条件下,30 分钟内使10 nmoL 的dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。活性检测条件为:50 mM KCl, 20 mM Tris-HCl (pH8.8),10 mM MgCl2, 30 nM M13mp18 ssDNA, 70 nM M13 测序引物

(-47) 24 mer, 200 μM dATP, 200 μM dCTP,200 μM dGTP, 100 μM[3H] dTTP, 100 μg/mL BSA 和酶,65℃温育。

贮存条件

50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM DTT, 0.1 mMEDTA, 0.1% Triton X-100 和50%甘油,贮存于-20℃。