产品特点：

本产品是专门用于各种藻类样品RNA提取的产品，它具有下列特点：

1. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。

2. RNA纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等。

3. RNA产量高，一般在20-70 ug/mL液体藻类培养物(约2.0 ×107个细胞)。

4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。

常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 将 1-5 mL液体藻类培养物在1.5 mL塑料离心管中5,000-7,000 rpm 4℃离心 1分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。

2. 加入0.5 mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。

3. 加入0.5 mL溶液B，剧烈振荡30秒。

4. 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA容易降解。

5. 5,000-7,000 rpm 4℃离心3-5分钟，转移上清到一自备的、干净的1.5 mL塑料离心管中。

6. 在上清液中加入0.2 mL自备的氯仿，充分振荡30秒混匀。

7. 4℃ 5,000-7,000 rpm离心3-5分钟，转移上清液到一自备的、干净的5-10 mL塑料离心管中。

8. 加入相当于上清液（约1 mL左右）3倍体积的溶液C和1倍体积的溶

液D，充分混匀。如果上清为1 mL，则加入3 mL溶液C和1 mL溶液D。

9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移0.7mL混合液到离心吸附柱中，室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5,000-7,000 rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入0.7 mL混合液，重复上面的操作，直到混合液全部挂柱。

10. 次洗涤：将0.7 mL通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。

11. 第二次洗涤：洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.3 mL通用洗柱液重复上步洗涤。

12. 室温离心空柱子（带收集管）半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。

13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5 mL塑料离心管中，加入30-100 uL RNA洗脱液。具体加多少根据RNA浓度决定，建议先使用小体积洗脱液，这样浓度过高还可以稀释。

14. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

15. RNA完整性的电泳检测：

注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以不要用于RNA电泳。

16. RNA产量和纯度产率测定：

将5-10 uL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE(pH7.5-8.2之间)中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD比值没有意义。