测定意义
FDA 水解??应能很好的??应土壤中微生物活性和土壤质??的变化以及生态系统中有机质的转化，是土壤质研究中的重要生物学指标之一??
测定原理
FDA 是一种无色化合物，在介质中能被许多土壤酶所催化水解，并??脱水??应，产生酶解终产物荧光素，稳定不易被分解，并在490nm 处有强吸收峰，通过检测490nm 处的吸光值变化可??算得FDA 水解酶活性??
自备实验用品及仪器
天??????温离心机??可见分光光度??/酶标仪??微??石英比色皿/96 孔板??恒温水浴锅??
试剂组成和配制
标准液??液体4mL×1 瓶，4℃保存??
试剂一??液体40mL×1 瓶，4℃保存??
试剂????粉剂1 瓶，-20℃避光保存，临用前加4mL 试剂??溶解??
试剂????液体40mL×1 瓶，4℃保存??
样本处理
??取风??过30-50 目筛土壤约0.1g，备用??
测定操作表
空白管 标准管 对照管 测定管
样本??g?? 0.05 0.05
标准液??μL?? 40
??蒸水??μL?? 40
试剂一??μL?? 200 200 240 200
试剂????μL?? 40
充分混匀，30℃，震荡1h
试剂????μL?? 160 160 160 160
10000g，25℃，离心5min，取200μL ??清于微??石英比色皿/96 孔板中测定490nm 处吸
光值A，△A1=A 标准管-A 空白管，△A2=A 测定管-A 对照管
注意??空白管和标准管只需测定??
酶活性??算公式
a. 用微??石英比色皿测定的??算公式如??
酶活性定义????克土壤??天产生1μmol 荧光素的??为一个酶活力单????
FDA 活性??μmol/d/g??=??△A2÷△A1×C标准品??×V ??总÷W
= 2.4×??△A2÷△A1??÷W
b. 用96 孔板测定的??算公式如??
酶活性定义????克土壤??天产生1μmol 荧光素的??为一个酶活力单????
FDA 活性??μmol/d/g??=??△A2÷△A1×C标准品??×V ??总÷W
= 2.4×??△A2÷△A1??÷W
C 标准品??标准品浓度100μmol/L??V ??总????应总体??，0.4mL??W??样本质??，g
注意??项
1. 尽采用新鲜土样或者短期??温保存样品，否则很难准确??映酶的活性??
2. 测定之前进行预实验，若吸光值较高，请进行适当的稀释再测定，并在算公式中乘以稀释倍数??