产品组成：
规格 50 assays 100 assays
线粒体试剂A 10ml 20ml
线粒体试剂B 10ml 20ml
试剂C 10ml 20ml
试剂D 10ml 20ml
蛋白酶抑制剂混合物 200ul 400ul
注：
● 蛋白裂解液： 含多种有效成分，可以充分释放线粒体蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。裂解
液中已含磷酸酶抑制剂混合物。
● 蛋白酶抑制剂混合物：包含7种独立的蛋白酶抑制剂，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin
A、Bestatin、E-64、EDTA。
注意：
1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以全部加入提取液。
储存条件：
线粒体试剂A 和B 于2-8℃保存，长期存放于-20℃保存；
试剂C 和D2-8℃保存；
蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：
一年。
注意事项：
● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管
底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 使用性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清
洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介：
我司线粒体蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞
和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、
血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的
线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western
Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白不可用于2D 电泳。如下游实验需要用于2D 电泳，请使用货号HR0191
的试剂盒。
产品特点：
1、使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包
含7 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白
酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒
使用方法：
使用注意事项：
?? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
?? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
?? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
?? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
?? 使用 Dounce 匀浆器匀浆，如果没有Dounce 匀浆器，用普通1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。也可
采用超声破碎的方法，建议功率30w，10s。采用普通匀浆器或超声破碎，建议镜检，保证细胞
80%以上的破碎率。
?? 每 200ul 试剂C 和试剂D 加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物混匀备用。
1. 取 1-2×107 个细胞①，在4℃，500×g 条件下离心2-3 分钟，小心吸取培养基，
尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 加入 200μl 冷的试剂 A，置冰上10 分钟。
4. Dounce 匀浆器匀浆30-40 下，然后在4℃，500×g 条件下离心5 分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 在 4℃，11000×g 以上条件下离心20 分钟。
7. 取步骤 6 的上清于另一干净离心管中，加入200ul 试剂C 混匀，在4℃，11000
×g 以上条件下离心5 分钟，取上清，即得胞浆蛋白。
8. 在步骤 6 的沉淀中加入200μl 冷的试剂B，混匀。
9. 在 4℃，11000×g 以上条件下离心20 分钟。
10. 弃上清。
11. 在沉淀中加入 80ul-150ul 试剂D，置冰上20 分钟，每隔5 分钟高速涡旋振荡
15 秒。
12. 即得线粒体蛋白。
13. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注：
① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
② 建议用BCA 法进行蛋白定量。
③ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。