Benzonase 是由粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)分泌的、由两个大小为26 kD 的亚基组成的一种广谱核酸酶,由Benzon 公司商品化,故名Benzonase。其活力比DNase I 强34 倍,能以相同的效率酶切单联和双链DNA 和RNA,将其消化成3-5 碱基长度(杂交限度以下)的5’-单磷酸寡核苷酸。其活性需要Mg2+,pH 在6-10 之间,适温度在35-44℃。

本产品是在野生型的Benzonase 的基础上经过基因工程改进而得,它具有下列特点:

1. 微量本产品就能高效降解所有形式(包括单链,双链,线性和环状)的DNA 和RNA,尤其适合从细胞裂解物中去除核酸,降低样品粘度而不影响蛋白电泳图谱。

2. 在有变性剂存在的条件下(如4M 尿素)还有活性,可以直接加入很多蛋白裂解液中。

3. 降解核酸完全,符合FDA 关于核酸污染的处理规程,可以用于工业生产。

4. 可以用于蛋白提取、2D 凝胶电泳、Western Blot、免疫沉淀等实验。

低温运输、-20℃保存,有效期两年。注意:不能放在-70℃保存。

使用方法:

一、酶的稀释

本产品浓度为1 U/uL,如果需要稀释Benzonase,需要自备酶稀释液,稀释液的配方是:50 mM Tris-HCl pH8.0, 20 mM NaCl, 2 mM MgCl2。

在稀释液中的Benzonase 只能在4℃放置数天。

二、用于去除核酸的标准试验(用户可以以此为参考设计自己的实验)

将500 ng 鲑鱼精DNA 溶解在50 mM Tris-HCl pH8.0,1 mM MgCl2,0.1 mg/mL BSA 中,然后加入90U 的Benzonase,37℃保温4 小时,只剩下0.2 ng 可以杂交检测的DNA,如果23℃保温4 小时,只剩下0.5 ng

可以杂交检测的DNA。如果0℃保温4 小时,只剩下1 ng 可以杂交检测的DNA。

二、用于降低E.coli 裂解液的粘度的标准试验(用户可以以此为参考设计自己的实验)

将7.5 g E.coli 悬浮于15 mL悬浮液(10 mM Tris-HCl pH 9.0,1 mMEDTA,6 mM MgCl2)中,加入适量的本产品,然后将悬浮液经过弗氏压碎器破碎后迅速置于0℃冰上。