产品特点:
本产品用于免疫印迹实验(Western)或核酸印迹实验(Southern 或Northern)中碱性磷酸酶(AP)标记的抗体的超灵敏检测。常用的AP ECL 底物主要以环二氧乙烷类衍生物为主(如AMPPD、Lumigen PPD 等),它们虽然灵敏度高,但达到平台期所需时间很长(30-60 分钟)。为提升速度,本公司开发了本产品。它具有下列特点:
1. 单成分溶液,即开即用,非常方便。
2. 高灵敏度,检测下限达到 10-10mol。
3. 反应时间短,一分钟内达到平台期,平台期长达 10 几小时,大大提升了检测速度。
4. 可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
5. 可用于 Western、Southern、Northern 等印迹杂交检测。
常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 按常规方法进行 Western、Southern、Northern 等印迹杂交实验,直到与AP 标记的二抗孵育结束。注意:A:为获得实验结果,请务必优化关键的印迹实验参数,包括检测样品的用量、一抗稀释度、AP 标记的二抗的稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择。一抗的推荐用量为50 ng/mL-1ug/mL,AP 标记的二抗的推荐用量为5ng/mL-50 ng/mL。B:由于奶粉中含有动物源性的生物素,故在使用亲和素/生物素系统时,不能使用含奶粉的封闭液。C:建议在封闭液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20(终浓度为0.05%),以减少抗体与印迹膜的非特异性结合。D:由于叠氮钠是AP 的抑制剂,故所有相关缓冲液中应避免使用叠氮钠。E:不能裸手接触印迹膜以避免蛋白污染。
2. 印迹膜与 AP 标记的二抗孵育完毕后,用自备的洗膜液充分洗涤核酸或蛋白印迹膜。
3. 弃去洗膜液,将本产品滴加在印迹膜的蛋白或核酸吸附面(也是抗体吸附面)上。一张8 cm×6 cm 的印迹膜一般需要1 mL 的本产品。注意:一定要确保溶液液覆盖整个印迹膜。
4. 室温孵育 5 分钟。
5. 去掉本产品,将印迹膜置于两层干净的保鲜膜之间。注意:一定要避免保鲜膜与印迹膜吸附面之间产生气泡。
6. 如果用 X-光胶片曝光,则在暗室内将X-光胶片和印迹膜的吸附面接触,曝光,洗片按常规操作进行;如果用或使用荧光成像仪或化学发光成像仪,则按照仪器说明书进行检测。
7. 如果背景较高,可将印迹膜再用自备洗膜液洗 2 次,每次3 分钟。