核糖核酸酶HII(RNase HII)为核糖核酸内切酶,适用于在双链DNA内部切刻核糖核酸的5’磷酸和3’羟基末端。核糖核酸酶HII还可以在冈崎片段的RNA部分进行多处切割
本产品具体有下列特点:
1. 属于重组酶。
2. 切刻聚合酶产物,掺入核糖核苷酸。
3. 除去杂交到poly(dT)上的mRNA poly(A)。
4. 在cDNA第二链合成时除去mRNA。
5. 无核酸内切酶、核酸外切酶和RNase污染。
6. 与T7核酸内切酶 I 联合使用时,在掺入有核糖核苷酸区域位点处产生一个双链的缺口。
7. 降解冈崎片段或其它RNA-DNA杂交链中的RNA部分。
反应条件
1×核糖核酸酶HII反应液:10 mM KCl,20 mM Tris-HCl,10 mM (NH4)2SO4,2 mM MgSO4,0.1% Triton X-100(pH 8.8,25℃),37℃温育。
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
下例是本产品一个典型的应用:用于切刻双链DNA模板的单个核糖核苷酸所在的位点,或者切刻冈崎片段5’末端的RNA区与3’端的DNA区域的交界核糖核苷酸的5’侧。
以20 μL反应体系为例:
1. 在离心管中加入2 μL 10×核糖核酸酶HII反应液中。
2. 加入100 pmol的双链DNA模板。
3. 补超纯水使反应体积到20 μL。
4. 加入1 μL核糖核酸酶HII到反应体系中并混合均匀。
5. 在37℃下反应15分钟。