本产品是在自主开发的一步裂解式超快细菌基因组DNA 提取试剂,其特点是快速,可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA 的快速提取。
1. 操作简单,整个过程不到10 分钟(对一个样品而言)。
2. 产率一般在3-10 ug/mL 过液培养细菌。
3. OD260/280 一般在1.8 以上。
4. DNA 片段长度一般在40-50 Kb 左右。
5. 适用范围广,可以使用于绝大多数细菌。
6. 也可以使用过夜培养细菌和菌落。
7. 得到的DNA 可以直接用于PCR,酶切或其他分子生物学实验。
常温运输及保存(溶菌酶需要冰袋运输,-20℃保存),有效期一年。
使用方法:
一: 对革氏阴性细菌
1. 如果一步式裂解液产生沉淀,需要65℃预热直到沉淀溶解,摇匀待用。
2. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的菌液转移到1.5 mL 塑料离心中,室温12,000 rpm离心1 分钟沉淀细菌,弃上清。
3. 加入0.5 mL 一步式细菌裂解液到离心管中,吹打混匀。
4. 加入 0.5 mL 专用上柱液到裂解液中,颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中,室温放置至少2 分钟。
5. 12,000 rpm 室温离心1 分钟,DNA 将吸附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集管中的穿透液。
6. 将 0.5 mL 通用洗柱液加入离心柱中,12,000 rpm 室温离心1 分钟,弃穿透液。
7. 重复第6 步操作。
8. 空甩半分钟,将离心吸附柱转移到新的离心管中。
9. 加 50-100 uL DNA 洗脱液,室温放置3-5 分钟。
10. 12,000 rpm 室温离心1 分钟即得DNA 溶液。
二: 对革氏阳性细菌
1. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的细菌离心1 分钟后,重悬于0.6 mL 溶菌液中(60mL 自备超纯水+600 mg 溶菌酶),颠倒混匀5-10 次后37℃保温30 分钟(有的菌种可能需更长时间,需要自己根据细菌不同而决定)。
2. 12,000 rpm 离心10 分钟,小心弃上清。
3. 后续处理接革氏阳性细菌处理的第3 步。