产品特点：

本产品基于WGA的、专门用于环状DNA（如质粒）扩增的全基因组扩增试剂盒，优化后的反应体系对环状DNA全基因扩增有良好的效果，可以方便、简单、快速、经济的得到环状DNA样品的扩增产物。本产品有如下优点：

1. 线状DNA清除剂可以清除残留的线状DNA，保留环状DNA，包括超螺旋DNA、带裂口（nick）的环状DNA和带缺口（gap）的环状DNA。

2. WGA采用基于phi29 DNA聚合酶的MDA法，能得到平均长度在10Kb以上的扩增产物，还具有高产量和高保真性的特点。

3. 可以将环状DNA扩增上万倍，是保留珍贵痕量DNA样品的办法。

4. 可使用各种环状DNA样品，包括质粒DNA，环状病毒DNA，线粒体DNA等。

5. 操作简便快捷，恒温（30℃）反应，无须PCR仪即可实现扩增。

6. 产物可用于多种后续试验，包括酶切、克隆、文库构建、测序、基因芯片分析等。

低温运输、-20℃保存, 有效期一年。

使用方法：

一、 去除环状样品中的线状DNA（线状DNA量不超过5 ug）

1. 在干净塑料离心管中，按下表加入各成分（30 uL体系）：

2. 加200 uL石蜡油后，37℃保温16小时。注意：保温时间过短可能会形成短的DNA片段，影响后续反应，所以保温16小时。必须加石蜡油，否则长时间保温期间水分会蒸发到管盖上。如果使用热盖打开的PCR仪则可以不加石蜡油。

3. 65℃加热灭活线状DNA清除反应的酶。

4. 电泳检测酶切效果。本产品不清除带裂口（nick）和带缺口（gap）的环状DNA（如质粒），所以这些片段将不会消失。如果所含线状DNA超过5 ug，则需要用非酶线性DNA清除剂清除或者稀释后用本法处理。

5. WGA扩增需要100 pg-100 ng的环状DNA，一般环状DNA的浓度都高于此范围，则需用超纯水将DNA稀释到40pg-40ng/uL，稀释过程中线状DNA清除反应中的成分也相应稀释，故一般不会影响后续WGA反应。如果样品中DNA浓度过低，则需要用微量核酸沉淀剂（需另买）沉淀后再溶解到适当体积的超纯水中，沉淀过程中线状DNA清除反应中的成分也被去除。

二、碱变性（对环状DNA，碱变性法一般优于热变性法，推荐用户使用）

6. 在PCR塑料管中加入不超过2.5 uL 环状DNA样品。如果体积不足2.5 μL，则用超纯水补齐。同时做一个不加样品的阴性对照。

7. 加入等体积（2.5 uL）WGA DNA变性液，轻柔吹打混匀。

8. 室温放置2分钟变性。

9. 加入5 uL WGA溶液A，轻柔吹打混匀后立即进入第15步。注意：热变性的DNA样品不能久存，否则DNA会缓慢复性，所以必须马上进入后续处理。

三、热变性法

10. 在PCR塑料管中加入1-5 uL纯化好的环状DNA，用量在100pg-100ng之间。同时做一个不加DNA模板的阴性对照。

11. 加入5 uL WGA溶液A，轻柔吹打混匀。

12. 如果不足10 uL，补水到10 uL。

13. 在PCR仪器上 95℃加热变性3-5分钟，其间打开PCR仪的热盖。也可以使用95℃水浴加热3分钟。

14. 热变性结束后短暂离心（将蒸发到管壁的水甩下），然后将样品管在冰上放置至少5分钟，立即进入第15步。注意：热变性的DNA样品不能久存，否则DNA会缓慢复性，所以必须马上进入后续处理。

四、WGA反应

15. 在10 uL碱变性或热变性的DNA样品中，加入10 uL的WGA溶液B，轻柔吹打混合均匀。

16. 加入0.5 μL Phi 29 DNA聚合酶（10 U/μL），轻柔吹打混合均匀。

17. 30℃保温3-12小时。使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴，在样品管中加入50 uL石蜡油以防水分蒸发，因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁，从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高，WGA三小时即可检测到DNA扩增。

18. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注：由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以将其灭活以免干扰后续反应。

19. 立即取2-5 uL WGA反应液进行电泳检测扩增效果。

20. 扩增的DNA可以用于后续试验或放冰箱长期保存。