产品特点：

由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题，本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上，开发了本产品，它具有下列特点:

1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3个月。

2. 操作简单，直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。

3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液，不适用于陈旧血液和冻凝血液，也不适用于禽类血液和其他动物血液。

4. 重复性好，效果跟进口同类产品相当。

5. 保存的样品可直接用本公司血液RNA提取试剂盒提取RNA。

常温运输和保存，有效期两年。

使用方法：

注意：RNase污染无处不在，用本公司的高效无毒固相RNase清除剂处理RNA工作区域，千万不要使用烷基化试剂DEPC（相当于芥子气）。

一: 以白细胞为材料的保存方法（此法效果好于全血保存法）

1. 室温1500-2000 g离心新鲜抗凝血液10-15分钟，上层为血浆，下层为红细胞，中间层为膜状的、含白细胞的Buffy Coat（含白细胞多的血液此层可能很厚）。

2. 吸出血浆后，小心将中间的白细胞层吸出（允许污染部分红细胞）到新的离心管中，加入5-10倍体积的本产品，混匀后放常温（不超过30℃）保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

二：以EDTA抗凝全血为材料的保存方法

3. 将血液取到EDTA抗凝管中后，迅速将0.5 mL血液与1.5 mL本产品混合，充分颠倒混匀，然后放常温（不超过30℃）保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细

胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

三：血液RNA的提取（本产品不含RNA提取试剂。此处以本公司的跟Trizol相当的动物RNAout操作步骤为参考。用户也可以使用其他RNA纯化试剂）

4. 提取RNA时，如果保存的白细胞在-20℃，则需要先室温化冻，如果保存在常温或4℃，则直接使用。

5. 取1.8 mL混合液到新的2 mL离心管中，5000 g室温离心1分钟。

6. 小心吸弃上清液（本产品），细胞将形成沉淀（如果样品时全血，沉淀中将含有大量血液蛋白）。注意：上清一般会很浑浊，一定要尽可能弃尽。有时沉淀上面有白色晶体出现，属于正常现象。

7. 在细胞沉淀中加入动物RNAout 1 mL溶液A，剧烈震荡30秒（不能感觉到震荡即可，一定要看见管底液体旋转起来，否则只是液体表面的震动，下同）。震荡后颠倒几次看溶液是否均匀，如果有颗粒状物体说明还需要震荡裂解。

8. 室温放置5分钟以使细胞充分裂解。

9. 将0.2 mL自备的氯仿加入到离心管中，剧烈震荡30秒。

10. 12000-15000 g 4℃离心3分钟。一般上清为无色的水相（含RNA，约0.5-0.9 mL）；中间层为白色，含有DNA、蛋白质和其他细胞破碎物，不要触及；下层为有机相，一般呈深红色。注意：有时水相比重大于有机相，出现反相现象，此时应该取下面的水相。

11. 小心将水相转移到另一自备的1.5 mL塑料离心管中。如果水相超过0.75 mL，则需要分成2管，否则在下步没法加入等体积的异丙醇。

12. 加入等体积的异丙醇到水相中，充分颠倒混匀。

13. 12000-15000 g 4℃离心10分钟沉淀RNA。

14. 吸弃上清。注意：如果离心后出现两个相，则需要吸弃上面的一相，然后在下相（含RNA）中加入一倍体积的超纯水和一倍体积的异丙醇，混匀后12000-15000 g 4℃离心10分钟沉淀RNA，吸弃上清。

15. 将75% RNase-free乙醇加入到RNA沉淀中，震荡几秒后12000-15000 g 4℃离心1分钟。

16. 弃上清

17. 12000-15000 g 4℃离心半分钟，用移液枪去除残留的液体。

18. 将20-50 uL DEPC处理的水加入到沉淀中并吹打溶解，立即用于下述完整性、产率和纯度的检测，也可直接用于后续RT-PCR等试验或存放于-80℃待用。

四: RNA的检测（列出步骤仅供参考，本产品不提供相关产品）

19. RNA完整性的电泳检测：强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶中单链RNA分子会自生折叠成各种形状，尤其不能使用DNA上样液，因为没有经过去RNase处理。

20. RNA产量产率测定：将5-10 μL RNA用TE缓冲液 (pH8.2)稀释10倍后检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5 ug/mL。

21. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。