产品特点:
本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中(如PCR反应)回收DNA片段。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜和独特的溶胶体系,或DNA反应体系中回收的DNA片段,回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。
1. 高效,回收效率可达90%(跟片段大小和胶浓度等因素有关)。
2. 快速,整个过程只需要十余分钟。
3. 回收DNA的范围为50 bp-40 Kb(但效率各不相同)。
4. 纯度高,本试剂盒回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR登等多种分子生物学实验。
5. 用途广,本试剂盒能回收单链、双链及环状DNA。
6. 储存方便,试剂盒可以在室温放置数月,不影响其质量。
常温运输及保存,有效期为一年。
使用方法:
1. 对胶回收:切取含DNA片段的琼脂糖凝胶(100 mg左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入一干净的1.5 mL塑料离心管(自备)中,用移液枪头捣碎,按重量比为1:3到1:5的比例加入通用溶胶液(100 mg琼脂糖凝胶需要加入300 uL-500 uL通用溶胶液)。
PCR回收:直接在PCR反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液,混匀,然后跳过第2步、直接从第3步做起。如果PCR反应中使用了石蜡,需要预先去除。
2. 50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟),其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在300bp以下,建议不要加热,以免DNA变性,影响回收率。
3. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中,套上液体收集管,静置3分钟。
注意:静置有助于DNA与离心吸附柱的硅胶膜结合。若加不完,可分两次加入并离心。
4. 12000-15000 g离心1分钟,倒掉收集管中的液体。
5. 加入0.7-0.8 mL通用洗柱液于离心柱中,室温静置2分钟。
6. 12000-15000 g离心1分钟,倒弃收集管中的废液。
7. 12000-15000 g离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
8. 将离心柱置于一新的干净的塑料离心管(自备)中,加入30-100 uL DNA洗脱液2.0于离心吸附柱硅胶膜的中央,静置3分钟。
9. 12000-15000 g离心1分钟。
10. 离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液,可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。
注意事项:
1. 电泳回收DNA时,电泳缓冲液可以为TAE、TBE或者百奥莱博的DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2。回收效果为SuperBuffer-2,TAE次之,TBE差。详细见百奥莱博 SuperBuffer-2产品介绍。
2. 通用洗柱液含有容易挥发物质,使用后一定要拧紧瓶盖,密闭保存。
3. 琼脂糖凝胶体积的大小与回收率成反比关系,即体积越大,越不利于回收,胶回收以使用100 mg琼脂糖凝胶为宜。
4. 如果在五分钟内凝胶溶化不完全,可以适当的延长水浴时间以使胶充分溶化,否则DNA包裹在琼脂糖凝胶中,影响DNA的回收效率。
5. 胶溶化后的液体转移到离心柱后,可以延长静置时间使DNA与膜充分结合,提高回收效率。
6. 洗脱DNA前的空甩很重要,其目的是去除膜上残留酒精,否则残留酒精会影响后续DNA反应。
7. 增大DNA洗脱液2.0使用量有利于回收,但要注意实际上样量与终回收体积的关系,以便于计算回收率。DNA洗脱液2.0可以用TE或水替代,但回收率稍有降低。