产品特点:
本产品是从菌株(K. lactis) 中表达分离的高纯度重组牛肠激酶(Enterokinase)轻链,它和天然提取的肠激酶一样,具有高度专一的蛋白切割特异性,其识别序列为Asp-Asp- Asp-Lys(DDDDK),切割位点
位于赖氨酸(Lys)残基的C 端。本产品活性比天然肠激酶更高。其分子量为26.3 kDa(但在SDS-PAGE 电泳时表观分子量为31 kDa)。本产品具有下列特点:
1. 是在多种反应条件、较宽的pH 范围(pH4.5-9.5)和较宽的温度范围(4-45℃)下具有活性。
2. 能忍受较高浓度的多种去污剂和变性剂的干扰。
3. 常用于切割表达蛋白N 端的各种标签。
4. 本产品经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一的目的条带,不含有非特异性的蛋白酶切活性。
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
注意:肠激酶可以在大多数溶解融合蛋白的溶液中有活性,故一般可以直接加入到融合蛋白重悬液中。但是如果融合蛋白重悬液中含有>2M 的尿素,>250mM 的NaCl,>20mM 的β-ME,>0.1%的SDS 或>50mM 的
imidazole,则需要先将蛋白样品在自备的1×肠激酶反应缓冲液中透析,然后再加肠激酶进行酶切实验。1×肠激酶反应缓冲液配方是50 mMTris-HCl,pH 8.0,1mM CaCl2,0.1% Tween-20。此外,磷酸盐对肠
激酶有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响其活性,因此在肠激酶的酶切体系内不能存在磷酸盐。
1. 在含融合蛋白的溶液中直接加入适量的肠激酶,使其与融合蛋白的比例为1:1000-1:20(即1 ug 融合蛋白需要1 ng 肠激酶)。
2. 室温放置8-22℃即可用于后续分离或处理。