产品特点:

本产品是百奥莱博miRNA 聚丙烯酰胺凝胶回收产 miRNABACK (BTN70604)的柱式升级产品,可用于回收 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的microRNA(miRNA)分子。它具有下列特点:

1. 可以回收 15-3000nt 范围内的各种长度的 RNA,包括 100nt 以下的 miRNA片段。

2. 柱式回收法,比沉淀法更见简单快捷。

3. miRNA 回收率在 70%左右。

4. 一站式,即开即用,操作简单,用户不需要自备任何试剂。

5. 扩容性好,可小规模操作,也可以大规模操作。


常温运输,4℃保存(RNA 洗脱液 4℃保存),有效期一年。


使用方法:

1. 切取含 miRNA 片段的 PAGE 凝胶(100 mg 左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入 1.5 mL 塑料离心管中,用移液枪头尽可能将其捣碎(先在酒精灯上将枪头的口烧密闭再用于捣碎),捣得越细越好。

2. 加入 300 uL 溶液 A。

3. 将离心管水平放置并室温摇晃 3 小时以让 miRNA 从 PAGE 凝胶中扩散出来。

如果回收的 RNA 片段长度超过 100 nt,摇晃时间应适当延长。提高温度到45-65℃,RNA 扩散速度会增加。

4. 12000-15000 g 室温离心 1-2 分钟,将含 RNA 的上清液转移到一个新的 5mL的塑料离心管中。

5. 加入 300 uL 溶液 B、300 uL 溶液 C 和 750 uL 溶液 D 混合均匀将离心管中的溶液分两次转移到离心吸附柱中,每次转移后都先静置3分钟,然后再12000-15000 g离心1分钟,倒掉收集管中的液体。

6. 加入700 uL通用洗柱液于离心吸附柱中。12000-15000 g离心1分钟,倒弃收集管中的废液。

7. 12000-15000 g离心半分钟以去除离心吸附柱中的残留液体。

8. 将离心吸附柱置于一新的干净的离心管(自备)中,加入25-50 uL RNA洗脱液,静置3分钟。

9. 12000-15000 g离心1分钟,离心管底部所得溶液即为纯化的miRNA溶液,可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。

10. 可以PAGE电泳检查回收效率,使用百奥莱博的高灵敏的超快核酸银染试剂(BTN81104)染色以节约miRNA样品的用量。