原理及特点:
本产品是基于TdT末端转移酶能够在DNA 的3’端添加dNTP尾巴的原理而设计
本产品是在上述原理的基础上开发的,具有下列特点: 1. 快速,15分钟即可完成标记反应。 2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记,还可用于3’突出的双链DNA标记,但后者标记效率稍低。 3. 可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高辛标记的核苷酸等)。 4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高辛标记核苷酸三种选择。 5. 同时提供非标记的dATP,用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。 6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
低温运输,-20℃保存,有效期一年
使用方法:
在0.2 mL微量离心管中按下表设置一个20 uL体系的标记反应(如果需要标记更多探针,请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度):
2. 37℃反应15分钟,延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在,一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长);如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP(其他dNTP也可,只是本试剂盒只提供dATP而已),每条探针上可加上约100个核苷酸,平均含5个标记核苷酸
3. 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4. 如果需要,可以PAGE电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率,带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记,探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针,请不要酚/氯仿抽提,因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以1-8 ng/uL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA,加入前还需热变性)。如果不立即使用,非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年,同位素标记的探针DNA不能放置。