产品特点：

第二代的非饱和型荧光染料（如SYBR Green I）在高浓度下会抑制荧光PCR，所以反应重复性很不稳定，并且不能用于要求严格的Tm 分析。本产品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen 一样，是第三代饱和型荧光染料，在饱和浓度下也不抑制荧光PCR 反应，具有下列特点：

1. 饱和浓度不抑制PCR 反应，因此得到的荧光信号更强。

2. 抗水解、抗热解和抗光解的能力强于目前常用的SYBR Green I。

3. 饱和浓度下染料分子没有机会在DNA 分子间发生移位，因此荧光强度跟DNA变性程度呈线性关系，可以用于精细的Tm 测定实验，如High-resolution melting curve analysis 等。

4. 跟目前常用的PCR 仪器(包括iCycler、LightCycler、ABI 测序仪) 兼容。

激发和发射光谱跟FAM 和SYBR Green I 接近，可以使用SYBR Green I 的光学设置参数。

5. 不能渗透进入细胞内，毒性和致突变性远低于SYBR Green I。

6. 可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲线分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛细管电泳等研究。

常温运输、-20℃避光保存，有效期一年。

使用方法：

先将本产品放置在室温融化，然后震荡10 秒钟，短暂离心后待用。下面以50 uL的标准PCR 反应体系为例说明其使用：

1. 在一干净的PCR 管中，加入下列成分：

10 X PCR Buffer (No Mg2+) 5 uL

MgCl2 50 mM 2.5 uL

dNTP 10 mM 1 uL

本产品(PCR 级绿如蓝染料) 2.5 uL

Taq DNA 聚合酶1-5 U

DNA 模板适量

PCR 引物5-50 pmol each

补水到50 uL

2. 放入荧光PCR 仪中进行qPCR，并在退火或延长反应时记录荧光信号。使用

的光学参数可以跟FAM 或SYBR Green I 完全一样。

注意事项：

1. 如果使用iCycler，可以不加FAM；如果使用ABI 系统，需要在Well Inspector选项下的非特异参照中选择“无”；使用LightCycler 时，在PCR 体系中再加入终浓度为0.5 mg/mL 的BSA 以降低仪器对染料和模板的非特异吸附。

2. 如果使用化学修饰过的Taq DNA 聚合酶，可能需要减低KCl 的浓度并提高Tris 的浓度。