产品特点:

本产品为在SDS-PAGE凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试剂盒。该方法使用三种试剂,所需时间仅需不到两小时,而其他的染色方法需要四到五小时。染色后的糖蛋白为品红色条带,背景为浅粉色或者无色。它有如下特点:

1. 包括一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白。

2. 简洁、易储存的试剂盒。

3. 本产品足够10张mini-PAGE胶或20张8X8cm蛋白免疫印记硝酸纤维素膜染色。

常温运输,4℃保存,有效期一年。

使用方法:

实验前准备

1. 配制3%乙酸溶液:将30 mL冰醋酸与970 mL超纯水混匀,室温保存备用。

2. 配制50%甲醇溶液:将250 mL甲醇与250 mL超纯水混匀,室温保存备用。

3. 配制氧化试剂:向氧化试剂干粉中加入250 mL的3%乙酸溶液,充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液,室温保存备用。

4. 配制还原试剂:向还原试剂干粉中加入250 mL的超纯水,充分混匀溶解后得到还原试剂溶液,室温保存备用。

5. 配制阳性对照(辣根过氧化物酶):向1 mg固体中加入0.5 mL超纯水,使得溶液浓度为2 mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1 mg/mL。对于80 mm×80 mm的凝胶来说,每个泳道加5到10 μL的阳性对照。将配制好的阳性对照分装后-20℃保存。

6. 配制阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂):向1 mg固体中加入0.5 mL超纯水,使得溶液浓度为2 mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1 mg/mL。对于80 mm×80 mm的凝胶来说,每个泳道加5到10 μL的阴性对照。将配制好的阴性对照分装后-20℃保存。

7. 样品稀释:用SDS-PAGE上样缓冲液将样品浓度稀释为1 mg/mL,对于80 mm×80 mm的凝胶来说,每个泳道加5到10 μL的样品。

凝胶染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)

1. 取出电泳后的SDS-PAGE凝胶,加入到100 mL 50%甲醇溶液中,完全浸泡30分钟后,倒出甲醇溶液。

2. 用100 mL 3%乙酸溶液洗涤胶块两次,每次轻轻振荡10分钟。

(注:如有需要,此步的胶块可在超纯水中4℃过夜处理。)

3. 将胶块转移到25 mL氧化试剂中,轻轻振荡15分钟。

4. 用100 mL 3%乙酸溶液洗涤胶块3次,每次轻轻振荡5分钟。

5. 将胶块转移到25 mL糖蛋白染色试剂中,轻轻振荡15分钟。(注:若染色试剂中有晶体析出,只需离心取上清液去除晶体即可,不要加热来溶解晶体。)

6. 将胶块转移到25 mL还原试剂中,轻轻振荡5分钟。

7. 用3%乙酸溶液洗涤胶块,然后用超纯水洗涤至显色,糖蛋白将显现为品红条带。胶块保存在3%乙酸溶液中。

硝化纤维素膜染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)

1. 用20 mL 3%乙酸溶液洗涤膜两次,每次轻轻振荡10分钟。

2. 将膜转移到10 mL的氧化试剂中,轻轻振荡15分钟。

3. 用10 mL 3%乙酸溶液洗涤膜3次,每次轻轻振荡5分钟。

4. 将膜转移到10 mL的糖蛋白染色试剂中,轻轻振荡15分钟。(注:若染色试剂中有晶体析出,只需离心取上清液去除晶体即可,不要加热来溶解晶体。)

5. 将膜转移到10 mL还原试剂中,轻轻振荡5分钟。

6. 用3%乙酸溶液洗涤膜,然后用超纯水洗涤至显色,糖蛋白将显现为品红条带。膜可保存在3%乙酸溶液中。