产品特点:

本产品是本产品是在pET 专用生长培养基的基础上开发而成的,它利用E.coli 自身对培养基中不同碳源的调控利用机制,实现外源蛋白在细菌达到饱和生长期后的自动诱发。本产品具有下列特点:

1. 本产品自动诱导表达,不需要添加任何IPTG 或相关诱导物,节约成本。

2. 免去了密切监控菌液密度的过程,尤其适合大规模筛选。

3. 极大将细菌的生长密度OD600 从2 左右提高20 以上。

4. 极大提高外源蛋白的表达量,可占细菌总蛋白的45%。

5. 与各种细胞培养容器(如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等)兼容。

6. 本产品即开即用,非常方便。

7. 适用于T7 RNA 聚合酶基因由lac 启动子控制的任何表达系统,如pET 系列。

8. 不适用于lacZ 或lacY 突变的宿主菌。

常温运输及保存,有效期两年。

使用方法:

一:培养基的配制

1. 配制自诱导培养基:将1.25 mL 溶液B 全部加入到200 mL 的溶液A 中即得自诱导培养基。注意:必须严格无菌操作,否则自诱导培养基非常容易长细菌。

2. 贴好标签待用。如果长期时间不用,可以冻存在-20℃。

二:培养基的使用

1. 将构建好的质粒转化入细菌,如BL21(DE3),涂于自备的、含有1%葡萄糖的LB 培养基中(需要加入适当浓度的抗菌素),37℃培养过夜。

2. 挑取单个细菌接种到自备的、含适当浓度抗菌素的液体LB 培养基中,37℃培养直到菌液浑浊但不饱和(一般需要6-8 小时)。

3. 将所得菌液按千分之一的体积比例加入自诱导培养基中(如果自诱导培养基体积是100 mL,则加入100 uL 菌液),同时加入适当的抗菌素。注意:在自诱导培养基中,如果使用卡拉霉素,其终浓度比一般的培养基高,需要100 ug/mL。由于本方法所得菌液密度大,故需要大量氧气,因此培养基的体积不能超过

三角瓶的五分之一。三角瓶底是皱褶式的,这样摇晃中氧气供应更充分。

4. 37℃培养过夜,或37℃培养到菌液饱和时降低摇床的温度到所需温度(对温度诱导型启动子)。

5. 收集菌液开始蛋白纯化步骤。