动物毛发不容易降解,同时含有大量的线粒体,所以是考古研究、法医研究和线粒体研究等领域的重要性实验材料。目前市场上专门用于毛发样品DNA 提取的产品很少,为此我公司开发了本产品,它具有下列特点:
1. 充分的酶法降解和快速的柱式提取相结合,前者使DNA 充分释放,后者使杂质充分被去除。
2. DNA 回收率一般在0.5 ug/100 mg 左右(理论产率一般是0.1-1.5 ug 之间)。
3. DNA 纯度高,OD 比值一般在1.6-1.8 之间。
4. 环保安全,不需要使用任何有毒的试剂(包括酚和氯仿)。
5. 提取的DNA 能够用于电泳、酶切、杂交检测和PCR。
6. 适合于动物的各种毛发。
常温运输及保存(蛋白酶K 溶液需要-20℃保存),有效期一年
使用方法:
1. 将30-50 mg 左右毛发充分剪碎(成芝麻大小就可以),转移到一个干净的1.5 mL 塑料离心管中。注意:从靠近根部的地方剪取样品。
2. 加入1 mL 溶液A 和20 uL 蛋白酶K 溶液(20 mg/mL),37℃保温10 小时(一般过夜保温就可以)。注意:让反应体系处于摇晃状态,此保温长度一般可以让毛发溶化。
3. 加入0.3 mL 的溶液B 和0.2 mL 的自备氯仿,振荡器上振荡30 秒充分混匀。
4. 12,000 rpm 室温离心3 分钟,小心将上清转移到新的1.5 mL 塑料离心管中。
5. 在上清液中加入等体积的溶液C,上下颠倒30 秒充分混匀。
6. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将0.7-0.8 mL 混合液转移到离心吸附柱中,室温放置2 分钟,12,000 rpm 室温1 分钟,弃穿透液。再把剩余的一半上柱,重复此操作。
7. 将0.7 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中,12,000 rpm 室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 将0.3 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中,12,000 rpm 离心半分钟(此步为第二次洗涤,一般可以省略)。
9. 空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。
10. 将离心吸附柱放置在一新的1.5 mL 塑料离心管中,加入30 uL 通用洗脱液。
11. 12,000 rpm 离心1 分钟,管底即为毛发DNA 溶液,可立即用于PCR,也可长期保存在-20℃。注意:由于头发中DNA 的含量十分少,所以电泳检测时即使全部上样也只能看见十分微弱的DNA 条带。