产品特点:
本产品是在本公司柱式土壤 DNA提取试剂盒(BTN71205)基础上开发而 得的大提升级产品,用于从各种土壤样品和河海沉积物中大量提取高质量的 DNA 的试剂。跟柱式土壤 DNA提取试剂盒相比它具有下列特点:
1.处理量大,多可以处理 20 克的土壤样品。
2.去污染效果更好,得到的 DNA 可以直接作为 PCR 模板或酶切,不需要再进行去腐殖酸处理。
3.操作过程更加简单快速,整个操作只需要 10 多分钟,扩容性好。
4.产量高,每克土壤一般可以提取到 5-50 ug DNA,片段长度在 20-50 Kb,OD260/280 一般都在 1.8 以上。
5.适合于各种土壤(包括河海沉积物)。
常温运输,4℃保存,保存期为一年。
使用方法:
1.65℃预热溶液 A,待其沉淀溶化后充分混匀,取 10 mL 加入到 1.5 mL塑料离心管中并放置于 65℃待用。
2.称取 3-20 g 的土壤,加入到含预热溶液 A 的离心管中,震荡器上剧烈震荡 5-10 分钟。
3.将离心管置于 65℃水浴中保温至少 5 分钟。
4.5000-7000 rpm 室温离心 3-5 分钟,将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色,实际颜色取决于腐殖酸的含量,上清液的体积一般为 6-8 mL)。
5.在上清液中加入等体积的溶液 B,上下颠倒 30 秒充分混匀,溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6.将离心管冰浴至少 5 分钟。
7. 5000-7000 rpm 室温离心 3-5 分钟,转移上清到新的 50 mL 离心管中,上清液颜色将比第 4 步得到的上清的颜色稍淡,体积在 14 mL 左右。
注意:下面第 8-第 9 步的氯仿抽提操作可以省略,直接进入第 10 步,但 DNA的产量会低 50%左右,OD260/280 在 1.7-1.8。
8. 加入 4 mL 的氯仿(自备),震荡器上充分振荡 30 秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 5000-7000 rpm 室温离心 3-5 分钟,小心转移上清到新离心管中,体积在 11 mL 左右。说明:离心后两相交界面将有白色膜状物,其中有机相部分颜色较深,一般呈淡棕色。上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。
10. 加入 1.5 倍体积的溶液 C,上下颠倒 30 秒混匀。
11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,5000-7000 rpm室温离心 1 分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,5000-7000 rpm 室温离心半分钟,弃穿透液)。
12. 加 10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,5000-7000 rpm 室温离心 1 分钟,弃穿透液。
13. 重复上个步骤。
14. 5000-7000 rpm 室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会污染 DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的 50 mL 塑料离心管中,加入 1 mL 通用洗脱液。
16. 室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。
17. 5000-7000 rpm 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 DNA 样品。